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    【求助】关于Not1酶切位点的酶切 - 丁香园论坛

    热度 最新. NOT1 的酶切效率一般不高!. 首先确定一下你在引物上加的noti的酶切位点是否正确。. 在检查有没有可能 noti识别的序列在菌中 被甲基化,导致序列不能被noti识别。. 谢谢dbb627大哥的指导. 我又从给我发引物的生工的单子上对比过了,NOT1的酶切位点完全

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    【求助】关于BamHI和NdeI双酶切的问题 - 丁香园论坛 - DXY.cn

    当然比推荐的多就没事. “虽然NdeI的切割效率和粘末端的连接效率都比较低,但是现在好多载体的单克隆位点都含有这个酶切位点”。. 在查文献的时候我也经常看到大家常用这个酶切位点,后来我仔细考虑了一下:很多原核表达载体RBS后面第一个酶切位点就是

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    上传neb的保护碱基表格,你可以在上面查到你该加什么样的保护碱基,若是不加p出来就只能先连接t载体在作酶切了。以下是noti的。 ttgcggccgcaa atttgcggccgcttta aaatatgcggccgctataaa ataagaatgcggccgctaaactat aaggaaaaaagcggccgcaaaaggaaaa

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    求助双酶切载体一直切不开。 - 丁香园论坛 - DXY.cn

    求助,没有办法了,最近在做克隆,载体是PMECS ,双酶切位点是psti 和noti ,一直切不开载体,质粒小提了几次,也切了很多次,几个月了,因为我这个实验是需要阳性率达到90%,转化数也要多,. 两个限制酶都是neb 100u/ul, 我用的是100ul体系,载体切1微克,酶加0.5ul

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    【求助】求助 双酶切切不出目的条带 - 丁香园论坛

    如下图,右边四个是我自己以公司给的质粒转化DH5a,然后摇菌,小提得到的质粒。依次为BamHI单切、noti单切、双酶切和质粒单独跑。中间的一个是marker 最下方为250bp。 左边四个是公司给的质粒,用dd水溶解。酶切与左边四个相同。

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    实验干货 | 分子克隆实验——无缝克隆 - 丁香园论坛

    分享到微博. 分享到微信. 认证. 医师认证 达人申请. 返回顶部. 丁香园是面向医生、医疗机构、医药从业者以及生命科学领域人士的专业性社会化网络,提供医学、医疗、药学、生命科学等相关领域的交流平台、专业知识、最新科研进展以及技术服务。.

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    【求助】NdeI和BamHI双酶切载体问题 - 丁香园论坛 - DXY.cn

    TAKARA的NdeI和BamHI切载体 预回收小片段 约为900bp 但怎么都切不下来 预实验时 各自单酶切都能切开 说明酶切体系没问题 质粒也没有问题 具体实验: 第一种方案: 先NdeI单酶切 过夜 酶切体系20ul 质粒 4ul buffer H 2ul 酶1 ul 切6管 这步倒是能切开 但之后胶回收在BamHI切就切不开了 酶切体系20ul: 胶回收后

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    【求助】双酶切条带弥散,怎么回事 - 丁香园论坛 - DXY.cn

    Dec 25, 2014 · 本人最近做双酶切,效果一直不好,酶分别是EcoRI,noti,目的片段大约1700bp,扩增出带双酶切位点的目的片段连在2700bp的pMD19-T载体上,测序成功后,抽提质粒进行双酶切,双酶切体系(20ul):EcoRI1.5ul,noti1.5ul,BSA4ul,10XH Buffer4ul,质粒9ul,酶切条件:37℃,时间梯度:4h,6h,8h,10h,具体见下图。

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    【讨论】酶切位点保护碱基真的要加那么多么? - 丁香园论坛

    我觉得这只能说明酶在作用于识别位点时所需占据的链长,并不能说明在设计酶切位点时要加那么长的保护碱基,比如我用的noti,要加10个碱基,切25个小时才95%的效率,这还是用了20倍的酶量!我师姐只加了4个碱基,也没见出现问题。

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    【求助】引物的酶切位点怎样加保护碱基? - DXY.cn

    不一定的,如果你设计的酶切位点是在上游就在5‘端加保护碱基,在下游就在3’端加,总这是要保证产物的两头都是酶切位点就对了,保护碱基一般要3个比较保险,大体的原则是加入的保护碱基不能使引物产生发卡等结构,这个用软件测一下就知道了,还有就是可以用保护碱基调节整个引物 …

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